Kasvien Kudosviljely (micropropagation&Plant tissue culture)

[Esine69]

Mitenkäs tuo kasvihormoneiden tilaaminen? Tuleeko tullin kanssa jotain ongelmaa, vai saako tilailla ihan huoletta? Laitan tarvittavat hormonit tilaukseen, jos voi ongelmitta tilata IBA:a, BAP:tä ja Ga3:a. Siinä tapauksessa olisi jotakin projektipäiväkirjaakin tiedossa.

Ylellä artikkeli mikrolisäyksestä:
Mikrolisäys tuottaa terveitä kasvikopioita

Ei mulla oo tullut koskaan ongelmia mutta tulli tietysti voi kiinnostua kun tulee kirje täynnä pieniä pusseja mikä on valkoista jauhetta täynnä.
Sit menee ikuisuus kun ne tutkii ne tullin labrassa ja ihmettelee miks ei mikään näytä olevan huumehia.
Muistaakseni on jotain kasvihormoneja mitä rajoitetaan myyntiä ja käyttöä on,  mutta en muista kyllä mitä se on.
Mut tietysti on se Phenylacetic acid PPA. Sitä ei parane tilailla jos jostain löytyiskin. Se on kielletty melkein joka maassa.
Meinaan sillä saat tullin ja poliisin kotio.
Kun siitä saa tehtyä tosi helposti amfetamiinia ja muita huumehia.

[Aku]

Pistän tänään hormonit, agarin ja kasvatusmedian tilaukseen. Löysin ne kohtuullisen halvalla osoitteesta http://www.kitchenculturekit.com/. Hanskalaatikkokin rakennettuna tulevia projekteja varten 

[Esine69]

Selvästi yksi hullu lisää .
Näyttää hyvältä. Kerro sit ihmeessä miten on homma edistynyt.
Homma on selvästikkin hanskassa ,eli hanskalaatikossa!

[Esine69]

Pistän tänään hormonit, agarin ja kasvatusmedian tilaukseen. Löysin ne kohtuullisen halvalla osoitteesta http://www.kitchenculturekit.com/. Hanskalaatikkokin rakennettuna tulevia projekteja varten 

Mä ostin täältä kans ekan satsin kun ekaa kertaan ryhdyin kokeilee mikropropagaatiota.
Minkä satsin meinaat ostaa?  LÄHTEEKÖ HETI KOVAA JA KORKEALTA ELI TUO EVERYTHING PAKETTI?

[Aku]

Pistän tänään hormonit, agarin ja kasvatusmedian tilaukseen. Löysin ne kohtuullisen halvalla osoitteesta http://www.kitchenculturekit.com/. Hanskalaatikkokin rakennettuna tulevia projekteja varten 

Mä ostin täältä kans ekan satsin kun ekaa kertaan ryhdyin kokeilee mikropropagaatiota.
Minkä satsin meinaat ostaa?  LÄHTEEKÖ HETI KOVAA JA KORKEALTA ELI TUO EVERYTHING PAKETTI?

En kokenut tarpeelliseksi tilata kittiä: hormoneja, puhdasta agaria ja ms:ää lukuunottamatta muut tarvittavat esineet saa haalittua Suomestakin. Tilasin seuraavan paketin:

Media Four: 2 MS, 2 Agar, 10 ml PPM, 4 Hormones $32 USD
Two 1-liter packets of Murashige and Skoog basal medium with vitamins, two 9-gram packets of agar, 10 ml PPM.  Transfer pipettes.

[cornell]

Paremmalla ajalla tulen lukemaan tämän huolella läpi. Kursseilla tuli aikoinaan hieman in vitro- lisäystä harrastettua.
Mikäs teitä muuten motivoi mikrolisäämään/ kudosviljelemään?

Ainoa mitä olen itse miettinyt ovat  protoplastifuusiot. Ei ollut muistaakseni tekniikkana vaikea. Saisiko hybridisoitua risteytymättömiä lajeja? Entäs polyploidit eli kromosomiston moninkertaistaminen...

[Esine69]

Paremmalla ajalla tulen lukemaan tämän huolella läpi. Kursseilla tuli aikoinaan hieman in vitro- lisäystä harrastettua.
Mikäs teitä muuten motivoi mikrolisäämään/ kudosviljelemään?

Ainoa mitä olen itse miettinyt ovat  protoplastifuusiot. Ei ollut muistaakseni tekniikkana vaikea. Saisiko hybridisoitua risteytymättömiä lajeja? Entäs polyploidit eli kromosomiston moninkertaistaminen...

Minulla on aina ollut motivaationa kasvien monistaminen ja paljon. Eli suurin volyymi kerralla. pienestä määrästä. Nyt on kyllä mielenkiinto jos pystyisi tekemään hybridejä tai juuri monistamaan kromosomien määrää. Siihen tarvisi Kolkisiinia että pystyisi tekee polyploideaja tai triploideja jne. Joskus tuli hommattua syysmyrkkyliljan(Colchicum autumnale) siemeniä että vois kasvattaa ja uuttaa siitä kolkisiinia. Se jäi vaan haaveeksi. Jos vaan sais sitä malarialääkkeen muodossa jostain. Tai vois sitä aina uuttaa tonic vedestä kun sisältää kolkisiiniä. En kyllä tiedä minkä määrän siinä tonicvedessä on itse alkaloidia. Varmaan tosi vähän. Olis se hieno kun pystyisi tehdä kromosomi lisäystä ja tehdä samalla vaikka chileistä vastustuskykyisiä hyönteisille ja kasvamaan tuplanopeasti. Ei varmaan kukaan oo koskaan monistanut kromosomeja chileille. Vaikkka Kaikki viljat ja maissit on tehty jo moneen kertaan. protoplastifuusion tekeminen ihan perus kasvihormoneilla taitaa olla mahdottomuus. Meinaan siinä tarvis noita geenimuunteluita, röngensäteilyä, ensyymejä, viiruksia tai vastaavaa.
PS.
Ei viitsi sekoittaa pakkaa liikaan ettei se mielekiinto lopahda liika tiedolla, meinaan tässä mennään jo yli perus mikrolisäyksen.

[Ryhis]

Tai vois sitä aina uuttaa tonic vedestä kun sisältää kolkisiiniä. En kyllä tiedä minkä määrän siinä tonicvedessä on itse alkaloidia. Varmaan tosi vähän.

Kiniiniä tonic-vedessä ainakin on reippaasti. Joskus koeluontoisesti litkin sitä useamman litran päivässä useamman päivän ajan todistaakseni urpoille koulutovereille, että tonic-vedessä on kiniiniä ja kiniini on kiinanpuun kuoresta saatava alkaloidi. Tämä oli siis aikana ennen wikipediaa ja sosiaalidemokraattisen unelman raiteilla jouduin tuhlaamaan aikaani imbesillien kanssa.

Edes valossa fluerisointi ei riittänyt vakuuttamaan näitä, jotka eivät erottaneet kiniiniä ja kitiiniä toisistaan, joten todistaakseni itselleni ja muille, litkin sitä menemään ginillä ja ilman. Parin päivän tankkauksen jälkeen alkoi korvissa soida ja kuulo muuttui muutenkin, mikä on yksi ensimmäisiä kiniiniyliannostuksen merkkejä.

[Esine69]

Niinpäs se tais olla. Muistin vaan että samaa alkaloidia olis ollut tonicvedessä mut sehän oli kiniiniä.
Miten mä muistaisin et jossain juomassa olis ollut kolkisiinia. Mieli tekee kepposia ku on humalassa.

[Ryhis]

Eikös "kolkkis" ole helkkarin myrkyllistä?

[Esine69]

No sehän riippuu määrästä tietty. Onhan se käytetty monessa lääkkeessä. Ei sitä kyllä huvikseen kannata alkaa syömään.
Ei se ny helkkarin myrkyllistä oo jos vaikka vertaa metanoliin joka on helkkarin myrkyllistä ja sitäkin on jotkut juoneet saamatta kuoleman kokemusta.
Kuka sammutti valot kun en nää ennää juuoa... kun muutama tippa voi sokaista.

Ei sitä suuhunsa kannata laittaa edelleenkään.
Mut ei se oo hirveä myrkky mitä ei uskaltais käsitellä kun lasikaapissä ja hirveät suojavarusteet päällä.
Mut eiköhän kaikkia kasvien alkaloideja kannata käsitellä varoen. Jokaisessa piilee vaaransa.
Oli se sitten Nicotina Tabacum tai Papaver Somniferumin, jne... niin kaikki kasvien alkaloidit on jollain tavalla hirveitä myrkkyjä.

[Aku]

No niin! Nyt käynnistyi oma mikrolisäysprojektini. Kasvualustan resepti on seuraavanlainen:

- 200 ml tislattua vettä
- 1,6 g agar-jauhetta
- 0,868 g MS + vitamiinit
- 1 mg BAP
- 1 ml PPM
- 0,15 mm IBA

Koeputkissa ja purnukoissa on seuraavat kasvit:
6 kpl Capsicum rhomboideum
5 kpl Capsicum tovarii
3 kpl Calea ternifolia
2 kpl Phalaenopsis-hybridi



Alunperin koeputkia kasvualustoineen oli 20, mutta joidenkin kasvualusta ei jähmettynyt kunnolla. Hieman kylmemmän sävyinen lamppu pitäisi vielä tuohon kasvatustilaan hankkia.

[Esine69]

Nyt sitten seurataan silmä kovana mitä tulee tapahtumaan.
Hienoa toimintaa.
Mä kaivan kans omat tavarat kaapista ja alan tutkimaan. Hell yeah!!!

[Aku]

Kasvimateriaalin puhdistamiseen käytetty etanoli oli ilmeisesti liian stydiä. Kaikki paitsi yksi Phalaenopsis kuolivat. Jäljelle jäänyt Phalaenopsiksen kukkavanasta napattu silmu on osoittanut kasvun merkkejä. Laitan siitä kuvaa, kun puhelin tulee huollosta. Uutta putkeen pian.

[Esine69]

Moi. Harmillista että ei onnistunut.
Mä suosittelen että käytät seuraavaksi isopropanolia. Se on paljon turvallisempi vaihtoehto kun etanoli. 70% IPA on tavallaan laimempaa kun 70% Etanoli. Et kokeile 70%IPAA ja jos on kasvi on vihreää, pehmeää ja ennestään suht puhdasta niin sterilisoi noin 30 sekunttia tai enintään minuutin. Jos kasvi on puuvartinen(puumainen), kovakuorinen ja likainen niin silloin se on noin minuutista kahteen. Jos epäilee että kasvi on hento ja ei kestä sitä 70% niin laimenna se 40-50% ja pidä pikkaisen kauempaa.

Mä kaivoin kasvihormonit esille ja kokeilin saada juurrutettua paremmin puuvartista Aronian marja pistokkaita ja sain ne perskeles tapettua! Laitoin noin 1000PPM Ga3 ja IBA 250PPM ja uitin niitä noin 30-50sekkaa liuoksessa ja laitoin ne puhtaaseen veteen. Sitten ajattelin että laimennan sen liuoksen ja sumuttelen kasviin sen ja sehän oli virhe. Ainakin uskon niin että sai sen takia liikaa hormoneja ja kuoli. Olis vaan pitänyt antaa olla sen jälkeen kun uitti varsia siel hormoniliuoksessa.
Aina ei voi onnistua

[Aku]

Yritys nro. 2

- Kymmenen C. rhomboideumin versonkärkeä
- Kymmenen koeputkea, joihin jokaiseen on laitettu 10 ml kasvualustaa

Kasvualusta:
- 100 ml vettä
- 3 g sakkaroosia
- 0,7 g agaria (enemmänkin olisi voinut laittaa, kasvualusta hieman liian vetelää)
- 0,5 mg BAP
- 0,5 mg KIN
- tippa IBA:a
- 1 ml PPM-liuosta
- sitruunahappoa ja natriumbikarbonaattia pH:n säätämiseen



Koeputket valmisteltiin sekoittamalla kasvualustan ainesosat lämpimään veteen, annostelemalla 10 ml kasvualustaa kuhunkin koeputkeen ja steriloimalla putket painekeittimellä. Kasvualustan annettiin jäähtyä huoneenlämpöiseksi.  Koeputkien kasvualustan pH on 6,3.

Solukkoviljeltävät kasvin palat leikattiin kasvista terävällä veitsellä, huuhdeltiin ja laitettiin veteen. Tämän jälkeen kasvinosat siirrettiin hanskalaatikon sisälle 3 % vetyperoksidiliuokseen 5-10 minuutiksi bakteerien tappamiseksi. Vetyperoksidissa liuottamisen jälkeen kasvin osat siirrettiin n. 40 % etanoliin puoleksi minuutiksi, jonka jälkeen ne huuhdeltiin vielä vetyperoksidissa ja siirrettiin aseptisesti koeputkiin. Koeputket suljettiin micropore-teipillä ja foliokerroksella ja siirrettiin kasvatustilaan loisteputken alle.






Kommentteja kaivataan. Mitä luulette, onnistuukohan tuo kasvatus? IPA:a en ole vielä saanut hankittua mistään. Apteekistako sitä saa?

[Aku]

Ainoa ensimmäisestä erästä selvinnyt kasvi, Phalaenopsis.

[lumppujussi]

Kommentteja kaivataan. Mitä luulette, onnistuukohan tuo kasvatus? IPA:a en ole vielä saanut hankittua mistään. Apteekistako sitä saa?

Isopropanolia saa apteekista, mutta siellä se on melkoisen kallista. Samaa ainetta löytyy muun muossa vaatteiden staattisen sähkön poistoon tarkoitetuista suihkeista. Löytyy myös Nesteen ja Teknoksen tuotekataloogeista. Oivallista kamaa mm. linssien ja näyttöjen puhdistukseen, ei jää rantuja.

[Dendrochili]

Onko tuo 70% hyvä vahvuus? Eikös tätä vahvuutta käytetä myös näytteiden säilöntään. Pitää kyllä itsekin ottaa tämä projektiksi!

[Aku]

Hyvin on kasvussa tuo mikrolisätty Phalaenopsis. 70% on hyvä vahvuus, ohutlehtisemmille kasveille miedompaa.